肉的宰后嫩化大部分归因于肌原氯纶格局的严重破坏，肌原氯纶格局是由内源性蛋清酶溶解酶挥发肌原氯纶和肿瘤组织系骨架蛋清酶形成的。与二十多年来时不时是特别关注大家都讨论的钙蛋清酶酶差异，胱天蛋清酶酶（caspases）近日作为感关注语录题。胱天蛋清酶酶在肿瘤组织系凋亡的实施第一阶段起着至关决定性的功能，这之中caspase-3在临死前蛋清酶溶解中的功能是多管理方面面和麻烦的，对此什么值得进步骤论述。S-亚硝基化根据改善钙减少、能量场分解、蛋清酶质挥发和肿瘤组织系凋亡来改善色泽，还有嫩度和持水力。一开始论述会发现S-亚硝基化能能下降依靠线粒体的caspase-3级联发生反应，这或者是背部肌肉肿瘤组织系凋亡和牛羊肉品質变幻的缘由。caspase-3的论述侧重是其与肿瘤组织系凋亡的直接关系，因此，好少有论述研讨S-亚硝基化改善caspase-3的管理机制。

2024年9月由长沙林业本科大学张万刚专家教授团队图片在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱怪物为该研究提供了亚硝基化呈现组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

2英文小标题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

论文期刊：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2021年引响因素：5.7

发过准确时间：2024年9月

的客户企业：南京农业大学

研究探讨原料：蛋白

拜谱展示能力：亚硝基化修饰组学

的技术路径：

一、的研究报告单

01.Caspase-3催化活性

目前为止尚不清除NO对caspase-3的促使帮助能不归因于NO介导的S-亚硝基化，不一样浓度值均值的GSNO充当外源性NO供应信息，以分析caspase-3的休外S-亚硝基化。结杲是因为，与如果没有GSNO的组比起，100、200和400μM GSNO组的caspase-3化学活化重要调低（图1），与原先新闻报道一致性。GSNO办理调低caspase-3化学活化的存在问题仍欠缺说明。

图1 有差异氨水浓度的GSNO加工对caspase-3生物的导致

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化情况

研发Caspase-3的亚硝基化情况，以揭示GSNO对Caspase-3的发应性。经GSNO加工处理后，测试到caspase-3蛋白酶S-亚硝基化挠度增长（图2）。这一些最后证明，外源性GSNO培养计划可顺利促进caspase-3的身体S-亚硝基化。令人感动吃惊的是，在没能GSNO存有的对应组中测试到这个变弱的S-亚硝基化带，这证明caspase-3可能性再次发生内源性的S-亚硝基化。除此以外，本研发中caspase-3的S-亚硝基化情况较高，而caspase-3的抗逆性降低了，这与之后的研发不符。但是，caspase-3的特男人S-亚硝基化淡化位点尚不明了，还必须要 进1步的不断探索。

图2 GSNO治疗对caspase-3S-亚硝基化平均水平的危害

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化遮盖组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的回文队列。蓝色的图标的回文队列认为S-亚硝基化肽，黄色图标的C认为S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱分析

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3吸附结球蛋白

结蛋清最为一类至关决定性的血组织细胞骨架蛋清，在保证肌血组织细胞格局的格局删改性和缩小性个方面起着至关决定性效果，深入分析S-亚硝基化caspase-3对结蛋清生物降解塑料的刺激性性拥有至关决定性效果。与Std（未用胱天蛋清酶-3和GSNO孵育的开始肌食物纤维材料蛋清）组相比之下，0 μM GSNO组（肌原食物纤维材料和caspase-3的孵育，无GSNO）的删改结蛋清含磷量显著性有效降低，提示信息caspase-3对结蛋清拥有不确定的蛋清溶解能力素质。在GSNO孵育后，删改结蛋清的含磷量凸显延长（P < 0.05）。凡此种种，当GSNO密度增大时，删改结蛋清的含磷量长期调涨（P < 0.05）（图5）。该发现了阐明，SNO呈现的caspase-3以层次根据的原则控制结蛋清的生物降解塑料。

图5.S-亚硝基化caspase-3吸附结淀粉酶

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3分解肌钙核蛋白-T

肌钙蛋清酶-T (TnT)是原肌球蛋清酶转换承担全身肌肉回缩的细细的的必需品肌原棉纤维棉棉蛋清酶。TnT的溶解特证是检则到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化环境下，caspase-3对TnT的溶解情況如图已知6如图是，与Std组（中含caspase-3和GSNO的肌原棉纤维棉棉）对比，caspase-3组中30 kDa TnT场面描写取得增强，呈现caspase-3陆续参与了TnT的溶解，凡此种种，caspase-3与GSNO的孵育引起30 kDa TnT减低。在100和200 μM GSNO组当中不能检则到取得的的差距(P > 0.05)，而当GSNO的氨水浓度高达400 μM 时，该场面描写取得少(P < 0.05)。这样的感觉呈现了SNO体现的caspase-3对TnT溶解的可抑制成用。结蛋清酶和TnT是caspase-3的的敏感底物，而GSNO正确处理减轻caspase-3的可溶性能够 引起肌原棉纤维棉棉蛋清酶溶解程度上减轻。上述讲到提出的，NO诱惑的S-亚硝基化能够 采用体现半胱氨酸残基来转换caspase-3的可溶性，行而进两步后果其对结蛋清酶和TnT的蛋清酶电离能力素质，而后果羊肉好品质。

图6. S-亚硝基化caspase- 3挥发肌钙淀粉酶-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、个人心得体会

本调查以此研究方案S-亚硝基化对caspase-3掩盖的会会影响基本随即对羊肉肌原玻纤板身体之外可降解的会会影响。核蛋清S-亚硝基化也可以掩盖caspase-3的半胱氨酸残基，以此影响caspase-3活力性拉低，加强组织领导骤遏制了其对羊肉肌原玻纤板核蛋清的核蛋清蛋白质水解能力素质。

三、拜谱工作小结

设计数据分析选择了酶活检验，亚硝基化突显组学数据分析，WB等加测手法，发展球血清S-亚硝基化能够突显caspase-3的半胱氨酸残基，这致使了caspase-3吸附性的降，并举一步一个脚印能够抑制了其对羊肉肌原植物纤维球血清的球血清溶解学习能力。本设计数据分析为解答球血清质亚硝基化对口感的控制管理机制给出好几个个新的视距。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的淀粉酶质组学、淡化淀粉酶质组学、代谢率组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸一系列好产品，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺过酸、total阳极氧化还原故宫场景、氧化钙含量巯基，欢迎大家咨询！

关联性资料：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663